抗原蛋白纯化流程

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纯化抗体的方法较多,建议用蛋白A 或蛋白G 微球纯化法作为最常用的方法。这种方法效率高,能为常用的实验方法提供足够纯化的抗体,而且随着商品化的蛋白A,和蛋白G 基质的出现,能将任何来源的抗体纯化。抗体的纯化也可采用传统的色谱法,在某些

抗原蛋白纯化流程实施细节

螂是非常可恶的,家里如果有蟑螂,每天晚上都会到处爬,特别是厨房特别多,爬到各种餐具上面,携带各种细菌,很容易导致疾病的传播,如果看到家中经常有蟑螂,一定要及时消灭。那么,消灭蟑螂的方法有很多,蟑螂怎么消灭,灭蟑螂最有效的方法有哪些。今天我要把最有效的除蟑螂方法分享一些给大家。最有效灭蟑螂办法一:植物、将新鲜夹竹桃叶置于蟑螂活动之处,蟑螂便不再靠近此处。其它富含强心苷的一些药用观赏植物,如洋地黄、羊角拗、铃兰、黄夹桃等,也可用它们的叶子来驱赶蟑螂,它们的气味同样可使蟑螂退避三舍。最有效灭蟑螂办法二:洗衣服、洗衣粉是一种高效的诱杀蟑螂的药剂,其作用甚至胜过一些化学杀虫剂。做法是把洗衣粉撒在蟑螂可能

1.将anti-MYC单克隆抗体偶联在溴化氢活化的琼脂糖凝胶柱上。

谢不邀娱乐圈不到30岁英年早逝的十大美女明星王洁曦:26岁女星王洁曦因患白血病,于8月9日晚11时去世,年仅26岁。她曾参与演出电影《建党伟业》。王洁曦1989年12月12日出生于湖南长沙,毕业于北京电影学院表演系。2008年参演都市喜剧《丑女无敌》,正式开始演艺事业。2011年参与演出《建党伟业》,饰演一位师范大学的女大学生。2013年主演的惊悚片《古镇凶灵之巫咒缠身》入围第37届蒙特利尔国际电影节展映单元。2014年在古装历史剧《大汉贤后卫子夫》中饰演滕姬,同年出演古代传奇剧《兰陵王妃》。宋汶霏:27岁2013年3月3日凌晨,女星宋汶霏因癌症医治无效病逝于广州,年仅27岁。据悉,号称“剧组

(CNBr-activated Sepharose 4B Amersham)

蝉蛹从地里拱出来没有脱壳,我们这里叫做“马婆婆”,等脱了壳变作了蝉我们这里叫做“马知了”……至于为什么这么叫我也不知道,只是一辈辈传下来的,约定俗成,我们也就这么叫了。我们这里如今的“马婆婆”已经不多了,一是水泥地面积在迅速扩大,极大影响了“马婆婆”从土地里拱出来的几率;二是从我记事起这几十年来每年夏季的夜里总有许多孩子拿着手电在寻找“马婆婆”,特别是我们小时候“逮马婆婆”是每个暑假夜里的一个重要的节目。那时候的收获是很大的,有的能逮一小编织袋,有的逮一洗脸盆,大都是炒吃了……据说蝉卵变成蛹在土壤里要经过漫长的四年光景,这样的生态节奏怎能经得起人们那么毁灭性的捉拿,食用呢?前几年城里有些饭店还

1>透析:使用NaHCO3 pH=8.3 溶液对anti-MYC抗体进行透析,4度透析过夜。

近日,有人卖一张1980年的旧版5元人民币,要价120万元,这张人民币,被收藏人士认为是“错版”人民币。纸币大写的“伍”字缺了一角,露出凤凰的翅膀。那么,这“错版币”是真是假?近日,家住大庆市红岗的李海(化名)刊登了一个广告,想把当年收藏的“错版”人民币卖了,或者是换取豹子手机号。据收藏人士说,由于是机器生产,人民币的印刷过程中难免出现一些细小的差错,有一些印刷错误,虽然经过人工或者机器的二次检查排除,但在大量纸币或硬币中,发现概率极低的“错版”,难上加难,这些有印刷小错误的人民币就这样流入市场。俗话说,物以稀为贵,确实如此。“错版”人民币成为收藏界的宠儿,一些“错版币”甚至被炒到上百万元。一

通过BCA法测定抗体浓度。

2>称取琼脂糖柱冻干粉(1g 冻干粉对应3.5ml体积)。根据琼脂糖凝胶柱:纯化的anti-MYC 4C5 抗体=1ml : 8~10mg 的比例称取相应质量的琼脂糖冻干粉。

使用1mM HCl 重悬。再用水冲洗后用NaHCO3 pH=8.3 溶液平衡柱料。

3〉将激活的琼脂糖凝胶柱和抗体按照上述2步骤中偶联比例于4度混合过夜,进行 偶联。

4〉漂洗:将偶联柱料填充到层析柱内,使用5倍柱料体积的偶联液漂洗。

5〉使用 0.1M pH=8.0 Tris-HCl 终止偶联反应。

6〉漂洗:使用5倍柱料体积的0.1M醋酸(pH=4.0)0.5M NaCl 和

0.1M Tris-HCl (pH=8.0) 0.5M NaCl 交替进行漂洗各3次。

7〉柱料保存在TBS(pH=7.0)+叠氮钠中。

2.柱平衡

1〉使用移液器,将0.5ml 柱料添加入层析柱中。

2〉使用5倍柱料体积的TBST冲洗一次。

3〉使用1倍柱料体积的 pH=3.5 甘氨酸冲洗三次。此步骤时间控制在20 分钟内。

4〉使用10倍柱料体积的TBST冲洗三次。

5〉使用10倍柱料体积的裂解缓冲液冲洗2次。

3.使用500ul 裂解缓冲液重悬柱料。

4.把细胞裂解液中加入0.5ml柱料, 在4度混合2h,进行抗原抗体结合。

5.将结合后的柱料添加到层析柱中。

6.使用3ml 细胞裂解液冲洗柱料。

7.加入10倍体积的TBST冲洗三次。

8.加入1ml TBS 重悬柱料。

9.加入甘氨酸预洗脱蛋白。

10.准备两只1.5ml EP 管,加入100 ul 甘油。

11.使用1ml 甘氨酸进行洗脱,洗脱液收集在上述10步骤中的EP管中。

共洗脱两次,每次使用1ml 甘氨酸进行洗脱。

12. 使用NaH2PO4 (pH=11)进行中和。

12.使用BCA法测定蛋白浓度。

13.使用SDS-PAGE估算蛋白纯度以及主带蛋白浓度。

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注射某一纯化蛋白质作为抗原打入人体内时,为什么产生的是多克隆抗原而不是单

注射某一蛋白作为抗原进体内,产生的是抗体,不会再产生抗原。(抗体是机体在抗原物质刺激下,由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白)。

虽然作为抗原的蛋白经过纯化纯度很高,但是注射入体内之后产生的依然是多克隆抗体。这是因为抗原上有多种抗原决定簇,而即使是同一种抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,也就是多克隆抗体。

所以多抗制备也比较简单,直接注射抗原提取血清就可以制备了。

纯化的蛋白作为抗原做elisa,背景总是很高怎么办

考虑

  1. 抗原精纯;

  2. 抗体精纯;

  3. 实验方法学做一下验证,考虑购买蛋白标准品。

多克隆抗体的纯化方法都有哪些

纯化抗体的方法较多,建议用蛋白A 或蛋白G 微球纯化法作为最常用的方法.这种方法效率高,能为常用的实验方法提供足够纯化的抗体,而且随着商品化的蛋白A,和蛋白G 基质的出现,能将任何来源的抗体纯化.抗体的纯化也可采用传统的色谱法,在某些情况下非常有用.这些方法包括DEAE 离子交换色谱法、硫酸镀沉淀法及其他方法.但是用蛋白G 或蛋白A 亲和柱法纯化较其他方法简单,并且纯化效果是其他方法的数倍.因此在所有方法中,我推荐这种方法.

有一种情况不适于应用蛋白G 或蛋白A 亲和柱纯化抗体,即多克隆抗体需要进一步分离,且针对某种特异性抗原的组分需要分离.此时可用抗原结合的亲和柱纯化抗原恃异性抗体.

原理就是抗原抗体的结合.蛋白A和G被锚定在树脂上,IgA和IgG在过树脂柱子的时候能够被protein A和protein G捕获,留在柱子上,其他的杂蛋白会被洗掉,最后用特殊的洗脱液能够将IgA和IgG纯化下来.原理跟普通蛋白纯化的原理是一样的,只不过吸附介质不一样而已.

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